一 細胞增殖檢測的意義

細胞增殖是生物體的重要生命特征，是生物體生長、發(fā)育、繁殖以及遺傳的基礎(chǔ)。監(jiān)測細胞群的生長對細胞的狀態(tài)研究很有必要?？蒲泄ぷ髡邆兘?jīng)常需要檢測細胞增殖情況，比如驗證抗腫瘤藥物的藥效時，監(jiān)測細胞增殖及存活情況；研究腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移模型時，分析細胞轉(zhuǎn)移或侵襲的路徑；分析創(chuàng)傷的修復(fù)或組織的重建時，檢測細胞生長情況等等。檢測細胞增殖及活性變化則可以很好的反映細胞的生長狀況。

 

二 細胞增殖的研究方法

細胞增殖的研究方法有很多種，根據(jù)檢測原理不同，主要分為DNA合成檢測法、代謝活性檢測法、細胞增殖標(biāo)志物檢測法等。本文重點介紹DNA合成檢測之Brdu檢測法，傳統(tǒng)DNA合成檢測方法使用胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）摻入DNA，然后通過放射自顯影或閃爍計數(shù)對DNA進行定量，該方法由于存在放射性物質(zhì)、實驗周期長、操作繁瑣，且需要昂貴的設(shè)備，目前已被BrdU（5-Bromo-2-deoxyuridine，5-溴脫氧尿嘧啶核苷）檢測方法取代，BrdU作為一種胸苷類似物，可選擇性地摻入增殖細胞的DNA中，而且可穩(wěn)定存在，并帶到子代細胞中，細胞經(jīng)過固定和變性處理后，可用免疫學(xué)方法檢測DNA中BrdU的含量，從而判斷細胞的增殖能力。

BrdU分子結(jié)構(gòu)

 

小編整理匯總了常見細胞增殖檢測方法，詳見下表。

 

細胞增殖檢測方法匯總

方法分類	檢測方法	檢測原理
DNA合成檢測	Brdu檢測法	BrdU是胸腺嘧啶核苷的類似物，能夠在細胞增殖時期代替胸苷摻入增殖細胞的DNA中，而后利用免疫學(xué)方法檢測DNA中BrdU的含量，從而判斷細胞增殖能力
DNA合成檢測	胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）滲入法	用同位素3H標(biāo)記TdR作為DNA合成前體摻入DNA合成代謝過程，通過測定放射性強度，反應(yīng)細胞DNA代謝及增殖情況
代謝活性檢測	MTT比色法	在活細胞生長和增殖過程中，線粒體內(nèi)的脫氫酶可將黃色的MTT分解成藍紫色的Formazan結(jié)晶，再利用酶標(biāo)儀測定，以反映出活細胞數(shù)目，間接反應(yīng)細胞增殖情況
細胞增殖標(biāo)志物檢測	Ki67,PCNA,MCM-2等相關(guān)抗原檢測	通過觀察增殖細胞中表達但非增殖細胞中不存在的特定蛋白質(zhì)，來反映細增殖情況
熒光染料檢測	羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂（CFSE）檢測法	CFSE是一種熒光染料，脂溶性高，進入細胞，可以與胞內(nèi)氨基酸發(fā)生不可逆的結(jié)合，在細胞的分裂過程中能進入子代細胞，同時熒光強度減半，再用流式細胞儀或熒光顯微鏡進行分析
實時動態(tài)電極阻抗檢測	RTCA實時無標(biāo)記細胞分析技術(shù)	將微電極列陣整合在細胞培養(yǎng)板孔底部，構(gòu)建實時、動態(tài)、定量跟蹤細胞形態(tài)和增殖分化改變的細胞阻抗檢測傳感系統(tǒng)。當(dāng)微電極表面的細胞引起貼壁電極界面阻抗的改變時，這種改變與細胞的實時功能狀態(tài)改變呈相關(guān)性

 

三 Exalpha Biologicals品牌BrdU檢測試劑盒

因組織細胞內(nèi)無內(nèi)源性BrdU存在，可利用BrdU相關(guān)抗體來檢測和定位摻入活躍增殖細胞新合成DNA的BrdU，Exalpha Biologicals 品牌BrdU檢測試劑盒的優(yōu)勢在于使用細胞層作為固相，將BrdU試劑摻入微孔板中的細胞，除了對細胞增殖情況進行評估外，還可以從單個培養(yǎng)物中分析細胞數(shù)量、形態(tài)和細胞抗原等信息。同時Exalpha Biologicals 品牌BrdU檢測試劑盒可通過試劑盒自帶的固定/變性溶液一步完成細胞固定、透化和DNA變性等實驗流程，大大縮短了實驗時間。Exalpha Biologicals 品牌BrdU檢測試劑盒中包含檢測細胞增殖活性所需的所有組分、操作簡便、無放射性、廣泛的樣本適用性，已得到眾多科研工作者的青睞。

 

四 Exalpha Biologicals品牌BrdU檢測試劑盒優(yōu)勢

簡便：提供預(yù)稀釋的滴管瓶，現(xiàn)用現(xiàn)配

安全：無放射性成分

完整：包含緩沖液、酶、陽性對照玻片和染色參考玻片

靈活：可用于任何物種組織樣本

靈敏：極低的背景干擾

經(jīng)濟：成本低，高通量，多種規(guī)格

 

經(jīng)BrdU處理的小鼠小腸免疫組織化學(xué)染色圖

 

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品牌	貨號	產(chǎn)品類型	產(chǎn)品名稱	應(yīng)用
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Exalpha	MUB0200P	BrdU抗體	Mouse anti Bromodeoxyuridine / BrdU	FC、ICC、IHC(frozen & paraffin)
Exalpha	A205P	BrdU多抗	Sheep anti BrdU (bromodeoxyuridine)	FC、IHC(frozen & paraffin)、IP、WB
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Agrisera	AS16 3998	BrdU單抗	Bromodeoxyuridine (monoclonal, clone MoBU)	determined by the investigator
Exalpha	X2834	BrdU試劑	Bromodeoxyuridine (BrdU)	IHC

 

 

 

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參考文獻

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• Gray, J. (Ed), Special Issue: Monoclonal antibodies against bromodeoxyuridine Cytometry 1985, Vol. 6(6)